構造生物学国際ワークショップ２ - バイオ・コンシェルジェ

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構造生物学国際ワークショップレポート
International Conference on Structural Genomics 2006 Hands-on Workshop in Yokohama

理研の食堂で昼食をとった後、横浜市立大学の学生実習用の実験室を使わせてもらって、午後の実習セッションに入りました。

25名という元々の募集定員は、この実験室を二つのワークショップでシェアしなければならないということからきていたのですが、この実験室はPCRの装置から電気泳動のゲルの撮影装置まで揃った非常に充実したもので、筆者が学生実験をしていた20年前とは隔世の間がありました。

午後の実習では、参加者に5つのグループに別れてもらい、David及びERATO 川崎研究室の研究者／技官のアシスタントを受けつつ、グループ毎に実験を行いました（写真：右）。

午後の実習の様子。
白衣を着ているのが講師のDavid。

実験手順は以下のようなものです。

（1）	膜蛋白質をGFPとのフュージョンとして発現できるベクターに、24種類の膜蛋白質を挿入して大腸菌をトランスフォームし、24穴のディープウェルプレートを使って培養する（実験前日にERATO 川崎研究室で用意）
（2）	培養された大腸菌を蛍光プレートリーダー用の96穴プレートに移し、菌体からのGFPの全蛍光を測定する
（3）	培養した大腸菌を溶菌して直接電気泳動にかけ、ゲルを蛍光イメージャーで観察する

詳しくは原著論文（ Drew D. et al Nat. Methods 3, 303, 2006 ）を参照していただきたいと思いますが、大腸菌のトランスフォーメーションから2日程度で、膜蛋白質の発現量をゲル上の単一バンドとして定量できる、という画期的な方法です。

また実際にはゲルにかけなくても、膜に組み込まれた蛋白質とフュージョンしたGFPしか蛍光を発しないため、菌体からの全蛍光を計るだけで蛋白質の発現量を推定できる、という優れた特徴もあり、多くの参加者からは、これほど速く、かつ簡便に膜蛋白質の発現実験ができるようになったことに感嘆の声があがっていました。

蛍光プレートリーダーと蛍光イメージャーを実験のために貸し出してくださった、日立ハイテクノロージーズと富士フィルムによる機器のデモンストレーションにも多くの参加者が熱心に質問する風景が見られ、こうした最新鋭の機器に対する参加者の高い関心を窺わせました。

スペースの関係から他のワークショップに関してはあまり詳しく触れませんが、筆者のロンドンの研究室からワークショップ1に参加したKuakarun Krusongによると、無細胞系のワークショップも大変に盛況で、小麦胚芽、大腸菌、昆虫細胞、及び組み替え蛋白質のみから再構成された系、の計4種類の無細胞蛋白質発現システムの実習があり、旧来の方法では発現の難しい蛋白質を効率よく迅速に発現させるのに非常に有効なシステムである、という印象を受けたとのことでした。

ワークショップのオーガナイズには、無細胞系のシステムを実際に販売する会社が積極的に参加しており、無細胞系発現システムが多くの研究者にとって実用のものとなってきたことを強く印象づけるものとなりました。

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