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網羅的トランスクリプトオーム解析テクノロジーと DNA免疫抗体テクノロジーを活用した新規創薬バイオマーカーの探索
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| 会期 |
2006年8月29日（火） 13:00 − 18:00
2006年8月30日（水） 13:00 − 18:00 |
| 会場 |
29日 東京 （社）日本工業倶楽部 5階 TEL：03-3281-1711
30日 大阪 ホテルラフォーレ新大阪 19階 TEL：06-6350-4444
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| 対象のお客様 |
公的研究機関のお客様 |
| 参加費 |
無料 |
| お申し込み |
事前登録制：会場の都合により事前にお申し込み願います。
お申込み受付E-mail：fbi@oyc.co.jp
ご日程、ご所属とお名前をお願いします
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| プログラム |
8月29日（火）・8月30日（水）共通プログラム
| 13:00 | 受付開始 |
| 13:30 | 開会 |
| 13:40〜14:40 |
【演題】
包括的高感度転写産物プロファイル技術（HiCEP技術）を用いた
バイオマーカーの探索
【演者】
衣笠公博 オリエンタル酵母工業株式会社 長浜生物科学研究所 |
| 14:40〜15:00 | コーヒーブレイク |
| 15:00〜16:00 |
【演題】
Genomic Antibodies&trade From antigen DNA sequence directly to antibodies.
【演者】
Larry Motyka Strategic Diagnostics Inc. |
講演終了次第
開始〜17:50 | 講演終了後、懇談会をご用意しております。 |
| 18:30 | 閉会 |
※都合により内容が変更される場合があります。予めご了承ください。
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| 講演趣旨 |
【演題】
包括的高感度転写産物プロファイル解析（HiCEP）技術を用いたバイオマーカーの探索
衣笠公博（オリエンタル酵母工業株式会社 長浜生物科学研究所）
【はじめに】
近年、DNAマイクロアレイをはじめとする遺伝子発現プロファイル解析技術の進歩により、様々な生物の遺伝子機能を体系的・網羅的に解析することが可能となってきた。また、これらの技術は、癌をはじめとする多因子性疾患の発生・進展プロセスの解明や、新たな診断法の開発、治療法の改善などへも応用されつつある。
オリエンタル酵母工業株式会社（OYC）は、遺伝子発現プロファイル解析技術として独立行政法人放射線医学総合研究所・遺伝子発現ネットワーク解析グループの安倍真澄博士らが開発した“包括的高感度転写産物プロファイル解析（High coverage expression profiling； HiCEP）技術”に注目し、HiCEP技術の導入を行ってきた。
さらに安倍博士らが設立したメッセンジャー・スケープ株式会社（湯野川春信社長、http://www.mscape.co.jp）への資本参加を行い、新規バイオマーカーの探索を目的とした実用開発を進めている。
本シンポジウムでは、HiCEP技術の原理とHiCEP技術を用いたバイオマーカー探索の実例として、新規癌マーカー探索の事例を紹介する。
【HiCEP技術とは】
HiCEP技術は、AFLP（Amplified fragment length polymorphism）法が基盤となっており、
��poly(A) RNAのcDNAへの変換
�∪�限酵素切断
��アダプター配列付加
��DNA増幅
�ス皺鯀�度電気泳動
�Ε汽鵐廛覺屬留貌哀僖拭璽麋羈�
という工程からなる。
制限酵素切断工程では、各poly(A) RNAを代表するcDNA断片が生成されるように4塩基認識の制限酵素を組み合わせて使用する。またアダプター配列付加工程では、専用のアダプターおよびプライマーを用いることで、各cDNA断片を偏りなく増幅することを可能にした。
HiCEP技術の第１の特徴は、DNAマイクロアレイ法と比べて高感度かつ再現性の高い発現解析が可能なことである。これまでにHiCEP技術を用いて転写産物プロファイル解析を行った結果、1回の解析で10,000〜30,000種類の転写産物を検出し、かつ1.5倍差以上の発現変動差を示す転写産物を識別することが可能であった。
HiCEP技術の第２の特徴は、新規の転写産物を検出することが可能なことである。
オープンプロファイリング・システムであるHiCEP技術では、発現している全転写産物に由来するcDNA断片を分離・検出するため、ヒト・ラット・マウスのように遺伝子配列情報が充分に解析されていない生物種に対して、事前に遺伝子資源（配列情報およびプローブ）を準備することなく網羅的な転写産物プロファイル解析を実施することが可能となる。また、ハイブリダイゼーション法では発現頻度の高い転写産物に埋もれてしまっていたような発現頻度の低い転写産物やスプライシングバリアントの転写産物だけでなく非コード領域の転写産物をも検出することが可能である。
【実例1： ヒト乳癌細胞を検出するためのマーカー遺伝子】
HiCEP技術を用いてヒト正常乳腺（1例）と組織学的異型度の異なるヒト乳癌組織（3例）転写産物プロファイル解析を行った。約7,000種類の転写産物を比較し、発現レベルに2.0倍以上の差が検出された転写産物群を抽出した結果、既知の癌関連遺伝子以外に受容体蛋白、酵素等の機能既知遺伝子（7遺伝子）と、3種類の機能未知遺伝子を同定した。
また、ゲノムDNA配列のみに高いホモロジーを示す新規遺伝子と推測されるcDNA断片（1遺伝子）を同定した。さらに、機能既知遺伝子から選択した3遺伝子について、特異的抗体を用いてER陽性乳癌組織スライドの免疫組織染色を実施した結果、乳癌組織中に存在する癌細胞で強い染色が確認された。
以上のことから、乳癌関連遺伝子の発現レベルをRNAまたは蛋白質として測定することにより、乳癌細胞の有無を判定できる可能性が示唆された＜特許出願済＞。現在、診断用試薬の上市を最終目標に、上記乳癌関連遺伝子がコードする蛋白質の特異的検出用抗体の開発を進めている。
【実例2： ヒト転移性乳癌細胞を検出するためのマーカー遺伝子】
HiCEP技術を用いてヒトのリンパ節転移（+）乳癌（2例）とリンパ節転移(-)乳癌（3例）の転写産物プロファイル解析を行った。約28,000種類の転写産物を比較し、顕著な発現レベル差が検出された転写産物群を抽出した結果、転移(+)乳癌で発現レベルが上昇する11転写産物と、転移(-)乳癌で発現レベルが上昇する6転写産物、計17遺伝子を検出した。
これら17遺伝子のうち6種類は既知の癌関連遺伝子であり、うち2種類は転移性乳癌との関連性が報告されているc-erbB2のスプライシングバリアントであった。また、既知の癌関連遺伝子以外にも機能既知遺伝子（8遺伝子）と、ゲノムDNA配列のみに高いホモロジーを示す新規遺伝子と推測されるcDNA断片（3遺伝子）を同定した。
以上のことから、転移性乳癌関連遺伝子の発現レベルをRNAまたは蛋白質として測定することにより、転移性乳癌細胞の有無を判定できる可能性が示唆された。
なお、本研究はOYCとメッセンジャー・スケープ株式会社の共同研究の成果であり、特許共同出願済である。
【おわりに】
OYCは、HiCEP技術を利用した新規バイオマーカー製品の開発を進めるため、臨床利用を目的とした共同研究先を広く求めている。またメッセンジャー・スケープ株式会社が展開する受託HiCEP解析サービスに参画し、様々な生物種を用いた基礎・応用研究においてHiCEP技術を利用いただけるような体制を整えている。
参考文献：
1）Fukumura, R. et al.: Nucleic Acid Res., 31, e94 （2003）
2）安倍真澄ら:蛋白質 核酸 酵素, 48, 1443 (2003)
3）Takahashi, H. et al.: Brain Res. Mol. Brain Res., 110, 1 (2003)
【演者プロフィール】
衣笠公博（Kinugasa Masahiro） [連絡先： kinugasa@oyc.co.jp]
オリエンタル酵母工業株式会社 長浜生物科学研究所 開発担当
＜略歴＞
1970年 京都府生まれ
大阪市立大学大学院工学研究科応用科学専攻 修了
オリエンタル酵母工業株式会社入社後、長浜生物科学研究所配属となる。
組換え蛋白製品開発、受託研究支援サービスの担当を経て、現在、シーズ探索/技術開発を担当する。
【演題】
Genomic Antibodies&trade - Custom Antibodies to Difficult Proteins
Genomic Antibodies&trade are custom antibodies made to protein antigens using aproprietary genetic immunization process developed at Strategic Diagnostics Inc.
The technology allows the direct transfection of mice or rabbits with antigen-specific DNA sequences triggering in-vivo expression of protein. The host generates polyclonal antibodies against the expressed protein antigen.
Genomic Antibodies&trade successfully recognize protein antigens for which antibodies have been previously elusive. The utility of Genomic Antibodies&trade has been demonstrated in nearly all antibody-based methodologies. Electronic transfer of protein or DNA sequence is all that is required, thus eliminating the need for traditional protein expression, purification and peptide synthesis.
With a production time of less than 76 days and a scale capable of simultaneously producing hundreds of antibody reagents against customer-selected targets at a significantly lower cost over traditional methods, Genomic Antibodies&trade is a compelling value to the biomedical, environmental, and agricultural industries.
【演者】
Larry Motyka
Product Director, Strategic BioSolutions&trade Antibody Products,
Strategic Diagnostics Inc.
Larry joined Strategic Diagnostics in 1992 as a hybridoma development scientistand tissue culture supervisor.
Larry has a B.A. in Biological Sciences from SUNY Buffalo and an M.S. and Ph.D. degree in Immunology from the Roswell Park Memorial Institute division of SUNY Buffalo. After receiving his Ph.D. degree in 1989, he joined the Wistar Institute of Anatomy and Biology in Philadelphia. In 1991, Larry joined the Harrison Department of Surgical Research at the University of Pennsylvania Medical School.
At SDI, Larry has served as radiation safety officer and is a member of the Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Today, Larry is responsible for marketing our antibody products and services.
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| シンポジウムURL |
http://www.oyc-bio.jp/2006.8.29.30%20oyc%20sinnpojyumu.htm |
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