免疫反応を利用した各種解析技術と機器（３／７page）

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免疫反応を利用した各種解析技術と機器（３／７page）

TOPIX
● 免疫反応解析で用いられる実験手法
   （サンドイッチ法｜競合法（直接競合ELISA）｜直接吸着法（間接競合ELISA））
● 免疫反応解析に利用される機器
   ◆ プレートリーダー（吸光プレートリーダー｜発光プレートリーダー｜蛍光プレートリーダー）
   ◆ マイクロビーズアッセイシステム
● 発色を利用して検出する試薬｜発光を利用して検出する試薬｜蛍光を利用して検出する試薬
● 実験における注意点（プレートウォッシャー）
● 受託サービス

●免疫反応解析に利用される機器

これまで紹介してきたように、EIAは酵素や色素で標識したサンプルの発色・発光を検出する実験系です。それ故に、セルを使って発色を吸光度計で、発光もスペクトロフォトメーターで検出することも出来ます。

しかし、ELISAでは抗体・標的物質を測定容器に吸着させるため測定容器は使い捨てになってしまい、高価なセルを使用するこれらの機器を用いるのは現実的とは言えません。また、大量のサンプルを解析する場合にも１セル単位でしか測定できないこれらの機器を使うのも効率的とは言えないでしょう。

そこで、従来の吸光度計・スペクトロフォトメーターと同等の測定感度を持ちつつマイクロプレートを測定できる装置としてプレートリーダーが開発されました。

◆プレートリーダー

プレートリーダーは、96/384wellプレートやマイクロストリップなどの、一般的なSBS規格に準じたプレートサンプルを解析する装置です。解析サンプルの種類や数の応じて、様々なシグナル測定方式がありますが、プレートリーダーは、励起光・放射光の作製・検出のために用いる仕組みにより、

・プリズム（グレーティング）を用いる機器
・フィルターを用いる機器
の２つの種類に分けることが出来ます。

プリズム（グレーティング）を用いる機器とは、励起光光源・放射光光源から放射される光をプリズム（グレーティング装置）に通し、特定波長だけを抽出するシステムです。

検出器の解像度によりますが、理論上ほぼ全ての波長について放射・検出が出来るのがメリットになります。また、得られる光は複数のフィルター類を介することがないので明るく、高感度な検出に向いています。反面、機器は大型化・高額化する傾向があります。同じ研究室内で研究者・研究内容によって扱う波長が異なる場合や共通機器として選択する場合に、高い汎用性をもつこのタイプの機器が力を発揮することでしょう。

フィルターを用いる機器とは、励起光・放射光の中から特定の波長だけを透過させるフィルターに通して、目的の波長だけを抽出するシステムです。

この手法は多くの機器で採用されていて、殆どの機器でフィルターはオプションで追加・交換することが出き、フィルターの搭載可能枚数がそのまま機器スペック・解析可能アプリケーションの数になります。しかし、使用する波長が複数の場合にはそれ相応のフィルター数を用意しなくてはならず、また実験の都度フィルターを交換する手間がかかります。

共通機器として複数の研究に使用するには不向きですが、特定の研究しか行わない場合などはフィルター搭載数も少なくすみますので、コンパクトで低コストな研究施設を構築する場合には良い選択でしょう。

以上の特徴を踏まえた上で、吸光プレートリーダー、発光プレートリーダー、蛍光プレートリーダーをそれぞれ見ていきましょう。

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