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進化する細胞分離・測定の技術と機器（３／６page）

TOPIX

● 細胞分離・細胞測定に利用される機器
   ◆ フローサイトメトラー（フローセルアナライザー｜フローセルソーター）
   ◆ イメージサイトメトラー
        ・セルマニュピレーションシステム（レーザータイプ（光ピンセット）｜電場タイプ）
        ・レーザーマイクロダイセクション
● 試薬・消耗品
● 受託サービス

●フローセルソーター

細胞の測定までの仕組みはフローセルアナライザーと同様、シース液と細胞懸濁液の圧力バランスにより液滴に１細胞ずつ含ませ、細胞を観察します。フローセルアナライザーでは通常、観察した細胞はその内容にかかわらず単一の容器に回収/廃棄されますが、フローセルソーターでは観察溶液を液滴にし、その液滴に電場を与え極性を持たせます。

この液滴が落下する経路に電場を発生させることで、液滴と電場との間の引力・斥力を生み出します。この時の電極コントロールを解析内容とリンクさせることにより、目的の細胞を複数の回収容器に回収することが出来ます（図３）。

	①	測定セルを通過する（した）細胞懸濁液・シース液は、セル全体（又は溶液のみ）を振動させる振動装置（トランスデューサー）によって一定の周波数で振動を与えられ、落下する際の液滴の形成を誘導されます。
	②	セル内の細胞は検出器によって測定されます。測定と同時に、この細胞を分取するか否かを瞬時に判断し、次の電極に対して信号を送ります。
	③	電極では落下してきた目的の液滴に対して＋もしくは－の荷電を行います。この時、目的の細胞に対して適切な荷電が出来るよう、どのタイミングで液滴が電極に近づくかをあらかじめ設定しておく必要があります。
	④	電極を通過してきた液滴は、その下の２枚の電極の間を落下します。上の電極で荷電された液滴は、逆の極性を持つ電極に引かれ落下方向を変えます。上の電極で荷電されなかった液滴（細胞が入っていない液滴・分取する必要のない細胞を含む液滴）は電極に反応しないので、垂直に落下します。
	⑤	電極の下にはサンプルの回収容器がセットされており、様々な測定パラメータの中から目的に応じて特定の細胞のみを分取することが出来ます。回収容器は複数用意することができますが、中にはマイクロプレートに１細胞ずつソート出来る機器もあり、シングルセルクローニングが可能となっています。
フローセルソーターも、フローセルアナライザーと同様に、細胞懸濁液とシース液に圧力を加えて流すことで１細胞ずつセルを通過させ、通過する細胞の散乱光・反射光を測定します。フローセルソーターはデータ取得後、この測定データを用いて細胞を選別し、分取したい細胞を含む液滴に対して電極による荷電を行います。この液滴が電極の間を通過する際に、液滴と電極との間に発生する引力・斥力を利用して細胞を分取していきます。

フローセルソーターのメリットは、フローセルアナライザーのメリットである高速大量処理能力を持ちながら、フローセルアナライザーでは不可能であったサンプルの回収が出来ることです。

反面、フローセルアナライザー以上にフローシステムの精度やデータ処理能力が求められるのと、瞬間的に電場や回収容器のステージをコントロールする機能が必要なため、機器は大型化し、またコストも大変高価になりがちな点がデメリットとなります。

フローセルソーターは、
日本ベクトン・ディッキンソン、ベックマン・コールター、ベイバイオサイエンス、ダコ・ジャパン

【順不同/（株）は略】

などから販売されています。（製品カテゴリ：細胞-フローサイトメトリーシステム）

それでは、次にイメージサイトメトラーを見ていきましょう。

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